慢病毒表达载体的构建及沉默FOXQ1基因在大肠癌细胞系DLD-1中的表达

　　近日，昆明医科大学 云南省第一人民医院（昆明医科大学附属昆华医院）消化内科研究人员发表论文，旨在构建FOXQ1基因shRNA慢病毒干扰系统，沉默FOXQ1基因在大肠癌细胞系DLD-1中的表达。研究指出，通过构建FOXQ1基因shRNA慢病毒干扰系统，成功获取FOXQ1基因沉默细胞.为后续FOXQ1基因在肿瘤发生发展的研究奠定实验基础。该文发表在2014年第19期《世界华人消化杂志》上。

　　根据FOXQ1基因的序列，设计合成3对shRNA干扰序列，退火后连接到载体质粒PLKO.1-puro，将重组质粒转化至STBl3感受态中，涂板培养挑取单菌落，摇菌后小提质粒，选取酶切及测序鉴定正确的重组质粒去内毒素大提，将质粒与辅助包装质粒pRSV-rev、pMDlg-pRRE和pCMV-VSV-G利用磷酸钙法共转染293-T细胞，收集病毒上清，感染目的细胞DLD-1，嘌呤霉素筛选FOXQ1沉默细胞，经荧光定量PCR及Western blot检测干扰效果。

　　酶切及测序结果显示shRNA成功插入载体PLKO.1-puro中，共转染293-T细胞成功获取病毒上清，感染DLD1细胞，经嘌呤霉素筛选出FOXQ1沉默细胞，荧光定量PCR及Western blot鉴定FOXQ1基因表达最高抑制率为90.4%。