吉九里香碱体外诱导人大肠癌HCT-15细胞凋亡的机理研究

　　近日，中国食品药品检定研究院国家药物安全评价监测中心研究人员发表论文，旨在探讨中药单体吉九里香碱体外诱导HCT-15细胞凋亡的分子作用机理。研究指出，吉九里香碱诱发HCT-15细胞凋亡的分子机制在于从基因水平影响Bax靶基因的转录表达，同时通过与Bcl-xL蛋白的BH3结构域特异性结合置换出Bax蛋白以增加Bax同源二聚体的浓度，进而影响二者的蛋白表达水平比例，最终导致线粒体功能紊乱来发挥其诱导HCT-15细胞凋亡的效应，且为P53和Caspases非依赖型。该文发表在2011年第09期《药物分析杂志》上。

　　采用Western Blotting、体外Bcl-xL蛋白竞争结合检测实验及RT-PCR对吉九里香碱诱导细胞凋亡的机制进行研究。

　　结果显示50μmol.L-1吉九里香碱分别作用HCT-15细胞6 h、12 h及24 h，P53蛋白表达水平基本没有变化；Cyto c呈时效性的从线粒体释放到胞质中，Bcl-2蛋白表达基本没有变化，Bcl-xL的表达被抑制在较低水平，吉九里香碱处理细胞6 h后Bax表达开始增加，Bax与Bcl-xL蛋白表达的相对比例上调；与死亡受体通路中相关的FADD表达未见异常，同时线粒体通路中的蛋白包括Caspase-7、Caspase-8、Caspase-9、Caspase-3等均没有被剪切，但相应的凋亡标志物PARP和Rb等以时间依赖形式被剪切；RT-PCR检测结果显示Bcl-2的mRNA水平基本不变，而Bax的mRNA水平随时间的增加而略有增加，说明吉九里香碱从基因水平影响Bax靶基因的转录表达；另外，吉九里香碱能明显竞争BH3与Bcl-xL蛋白的结合，强度甚至强于阳性药HA14-1。