节点文献两种提取铜绿假单胞菌外膜囊泡的方法比较

近日，重庆医科大学附属儿童医院重庆市儿童发育重大疾病诊治与预防国际科技合作基地儿科学重庆市重点实验室儿童发育疾病研究省部共建教育部重点实验室研究人员发表论文，旨在对两种方法提取的铜绿假单胞菌（PA）的外膜囊泡（OMV）的纯度、产量及外毒素A（ETA）含量进行比较。研究指出，Optiripe密度梯度离心法提取的PA的OMV的产量和纯度和ETA含量以及激活宿主细胞炎性应答的能量均高于超滤浓缩法。该文发表在2014年第03期《上海交通大学学报医学版》杂志上。

 分别采取超滤浓缩法和Optiprep密度梯度离心法提取PA的OMV，负染电镜检测形态及纯度；BCA法检测两种方法提取的OMV产量并用Western blotting对OMV中所含ETA进行比较；建立OMV感染人肺癌上皮细胞A549模型并检测IL-8表达水平。

 超滤浓缩法提取的OMV中存在明显的细胞碎片、鞭毛等杂质，产量为21.3μg/1010个细菌，密度梯度离心提取的OMV无明显杂质存在，产量为48.7μg/1010个细菌；相比于超滤浓缩法，密度梯度离心法提取的OMV中含有更高浓度的ETA且诱导A549细胞产生更高水平的IL-8。