靶向MR-1基因shRNA表达载体的构建及其对白血病K562细胞增殖的抑制作用

　　近日，中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所肿瘤室研究人员发表论文，旨在构建一种靶向MR-1基因的shRNA稳定表达载体，并检验其对白血病K562细胞增殖能力的影响。研究指出，利用pCD-shRNA质粒构建了一个可表达MR-1-shRNA的表达载体，该载体转染K562细胞后引起细胞增殖能力降低。研究表明MR-1基因在肿瘤细胞增殖过程具有促增殖作用，其机制是降低Jak2和Bcr-Abl的磷酸化水平。该文发表在2013年第01期《中国医药生物技术》杂志上。

　　以带有H1启动子可稳定表达靶基因shRNA的pCD-shRNA为载体，采用BamHI和HindIII酶切pCD-shRNA并回收线性空载体，采用T4DNA连接酶将MR-1shRNA模板DNA双链与酶切后线性化的载体连接，从而建立稳定表达MR-1-shRNA的载体。将构建的pCD-shRNA-MR-1载体转染人白血病K562细胞，建立稳定沉默MR-1的细胞系，采用细胞计数法和westernblot对MR-1沉默后细胞的增殖能力和信号通路进行检测分析。

　　成功构建了可稳定表达MR-1-shRNA的载体pCD-shRNA-MR-1，经酶切鉴定及基因测序测定，结果表明载体中的MR-1-shRNA与设计序列完全相符，目的基因序列准确无误。将pCD-shRNA-MR-1转染白血病K562细胞，建立了两株稳定沉默MR-1的K562/MR-1细胞株。细胞增殖实验表明，MR-1稳定沉默细胞的增殖能力显著降低；细胞信号通路结果表明，MR-1稳定沉默细胞Jak2和Bcr-Abl的磷酸化水平降低。