uPAR在类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞中的功能及机制

　　近日，中山大学附属第三医院风湿免疫科研究人员发表论文，旨在采用RNA干扰（RNAi）技术阻断类风湿关节炎（RA）成纤维样滑膜细胞（FLS）尿激酶型纤溶酶原激活物受体（uPAR）基因的表达，探讨uPAR基因沉默后对RA-FLS功能产生的影响及有关机制。研究指出，uPAR在RA-FLS的增殖、周期及迁移中起重要作用，这可能与其对PI3K/AKT通路的激活有关。该文发表在2014年第01期《中山大学学报（医学科学版）》杂志上。

　　收集行关节置换术或滑膜清理术的RA患者的滑膜组织，组织块法培养RA-FLS。通过阳离子脂质体转染的方法，转染体外合成的特异性uPARsiRNA；利用荧光定量PCR法和Western blotting法检测uPAR沉默效果；CCK8法检测细胞增殖抑制率；流式细胞技术检测细胞周期改变；Transwell趋化小室测定细胞的迁移能力；Western blotting技术分析沉默uPAR基因对RA-FLS中PI3K/AKT通路的影响。

　　uPAR-siRNA能有效阻断RA-FLS中uPAR基因在mRNA和蛋白水平上的表达。沉默uPAR基因后，细胞48、72、96 h增殖抑制率分别为（17.51±2.27）%、（28.62±4.82）%、（22.91±5.78）%，显著高于对照组（P<0.05）；uPARsiRNA干扰后，被阻滞于G0/G1期的细胞增加，而S和G2/M期的细胞减少；Transwell趋化小室结果显示：与对照组相比，特异性干扰组的RA-FLS迁移细胞数（35±11）相比空白对照组（138±21）和NC-siRNA组（136±19）明显减少（P<0.05）；转染后的RA-FLS相对于对照组，PI3K、AKT、GSK3β的磷酸化水平显著降低（P<0.05）。