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RNA干扰抑制EGFR基因表达对子宫内膜癌细胞上皮间质转化的影响

  近日,上海交通大学附属第六人民医院妇产科研究人员发表论文,旨在构建针对表皮生长因子受体(EGFR)的shRNA质粒载体,转染人子宫内膜癌Ishikawa细胞株,检测RNA干扰对抑制EGFR基因表达及子宫内膜癌细胞上皮间质转化(EMT)的影响。研究指出,抑制EGFR基因表达可部分逆转子宫内膜癌细胞EMT相关基因的表达。该文发表在2013年第04期《上海交通大学学报(医学版)》杂志上。

  体外构建针对EGFR的shRNA质粒(pRNAT-EGFRshRNA),脂质体法转染Ishikawa细胞。实验设阴性对照组(未经任何转染)、pRNAT-EGFRneg组(空白质粒载体)、pRNAT-EGFR1组、pRNAT-EGFR2组和pRNAT-EGFR3组。采用实时荧光定量RT-PCR和Western blotting技术检测EGFR mRNA及蛋白的表达变化,并检测转染前后Ishikawa细胞中EMT相关指标E-cadherin、α-catenin、N-cadherin和Vimentin的表达变化。

  pRNAT-EGFR2组和pRNAT-EGFR3组细胞EGFR mRNA和蛋白的表达量均明显低于阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05);pRNAT-EGFR1组EGFR mRNA和蛋白的表达量与阴性对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。RNA干扰抑制EGFR基因表达后,与阴性对照组比较,pRNAT-EGFR2组和pRNAT-EGFR3组Ishikawa细胞上皮标志物E-cadherin和α-catenin的mRNA及蛋白表达水平均上调(P<0.05),间叶标志物N-cadherin和Vimentin的mRNA及蛋白表达水平则显著下调(P<0.01)。