体外扩增大鼠肌源性干细胞的安全性研究

　　近日，武汉大学人民医院研究人员发表论文，旨在研究经体外扩增的大鼠肌源性干细胞的安全性，为将来肌源性干细胞移植治疗压力性尿失禁的临床应用提供参考。研究指出，大鼠肌源性干细胞体外培养至第10代后没有发生突变，不具备体内致瘤性，初步证实了体外传至第10代的大鼠肌源性干细胞的安全性。该文发表在2014年第01期《武汉大学学报（医学版）》杂志上。

　　分离培养出大鼠肌源性干细胞，在体外传代培养，对传至第10代（PP6-10）的细胞进行刀豆球蛋白A（ConA）凝聚实验、双层软琼脂培养实验初步分析细胞表面结构和生长特性是否发生恶变；采用免疫细胞化学的方法检测PP6-10的端粒酶活性以及c-myc，p53，c-fos肿瘤相关基因的表达情况；采用裸鼠皮下致瘤实验观察其是否具备致瘤性。

　　体外培养至第10代以内的大鼠肌源性干细胞在培养瓶底分布均匀，贴壁后多为纺锤形或梭形，与原代培养的肌源性干细胞形态相比无明显改变；在不同浓度的ConA溶液中，PP6-10均未产生凝聚反应；将PP6-10置于双层软琼脂中培养12d，未见细胞克隆形成，培养至20d，细胞数量明显减少；通过免疫细胞化学方法检测PP6-10中的c-myc，p53和c-fos等肿瘤相关基因的表达结果均为阴性，PP6-10中的端粒酶逆转录酶（hTERT）的表达结果呈弱阳性；将不同浓度的PP6-10接种于裸鼠皮下，观察4个月后接种部位没有肿块形成，病检其接种部位以及肝脏、肺脏均无异常表现。