曲古霉素A联合环巴胺对胰腺癌PANC-1细胞凋亡的影响

　　近日，温州医学院附属第一医院普外科研究人员发表论文，旨在本实验旨在研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古霉素A（TSA）联合Hedgehog（Hh）信号通路阻断剂环巴胺（CYA）干预对胰腺癌PANC-1细胞凋亡的影响并初步探讨其可能机制。研究指出，曲古霉素A、环巴胺可协同抑制Hh通路，诱导胰腺癌PANC-1细胞的凋亡。该文发表在2014年第11期《中国药学杂志》上。

　　采用CCK8方法检测曲古霉素A、环巴胺作用24 h对PANC-1细胞50%抑制浓度（IC50）。用Hochest 33258荧光染色观察曲古霉素A、环巴胺单独及联合处理PANC-1细胞24 h后凋亡；荧光定量聚合酶链式反应（Q-PCR）检测Hedgehog信号通路关键分子及凋亡相关基因mRNA表达的变化；蛋白免疫印迹法检测凋亡相关蛋白（Bcl-2、活化胱天蛋白酶-3，活化胱天蛋白酶-8，活化胱天蛋白酶-9）及Hedgehog通路关键分子蛋白（Gli1、Smo、Ptc-1）表达的改变；细胞免疫荧光标记法检测Gli1蛋白表达的变化。

　　Hochest 33258染色显示，曲古霉素A及环巴胺均可诱导胰腺癌PANC-1细胞凋亡，24 h IC50分别为（0.51±0.07）μmol·L-1和（33.6±2.3）μmol·L-1，两者联合指数为0.835，具有低度协同作用。曲古霉素A及环巴胺干预后Bcl-2 mRNA表达下降，Bax mRNA表达上调，尤以联合组明显。曲古霉素A 0.5μmol·L-1干预可抑制Gli1 mRNA的表达，联合环巴胺20μmol·L-1后对Hedgehog通路的抑制效应进一步增强，降低Gli1、Smo mRNA表达量，上调Gli3 mRNA的表达。Western印迹结果显示，曲古霉素A 0.5μmol·L-1、环巴胺20μmol·L-1单独及联合处理PANC-1后，凋亡相关蛋白胱天蛋白酶3、胱天蛋白酶8和胱天蛋白酶9活化程度进一步上升，凋亡抑制因子Bcl-2的表达明显下降，Hedgehog信号关键分子蛋白Gli1、Smo、Ptc-1表达均明显下降，以联合组最为明显。细胞免疫荧光结果也显示Gli1表达明显下降。