应用BSP联合TA克隆测序检测胰腺癌中RASSF1A基因启动子区异常甲基化

　　近日，南京医科大学第一附属医院普外科研究人员发表论文，旨在检测Ras相关区域家族1A（Ras association domain family 1A，RASSF1A）在胰腺癌细胞株中的甲基化和表达状态，探讨其启动子异常甲基化在胰腺癌发病过程中的作用。研究指出，胰腺癌细胞株PANC-1及癌组织、癌旁组织RASSF1A基因表达与启动子区甲基化状态有关，启动子区的高甲基化导致PANC-1中RASSF1A基因的表达沉默。该基因异常甲基化有望成为胰腺癌的早期诊断指标和治疗靶点。该文发表在2012年第01期《南京医科大学学报(自然科学版)》杂志上。

　　采用重亚硫酸盐测序PCR（bisulfite genomic sequencing PCR，BSP）联合TA克隆测序检测胰腺癌细胞株PANC-1及胰腺癌组织、癌旁组织及正常胰腺组织中RASSF1A启动子区CpG岛的甲基化状态，以甲基化酶抑制剂5-aza-2-deoxycitydine（5-aza-dC）处理PANC-1，观察处理前后甲基化率变化情况，逆转录PCR观察RASSF1A的mRNA表达情况。

　　在PANC-1细胞中RASSF1A启动子的甲基化率平均为100.00%，在正常胰腺、癌旁及癌组织中平均分别为1.79%、93.75%和100.00%，与正常胰腺组织相比，胰腺癌旁及癌组织的RASSF1A启动子甲基化率明显增高（P<0.01），而癌旁及癌组织之间无明显差异（P>0.05）。在PANC-1细胞、胰腺癌组织及癌旁组织中RASSF1A基因无表达，在正常胰腺组织中RASSF1A基因呈阳性表达；PANC-1细胞经5-aza-dC处理后，RASSF1A的甲基化率下降（88.89%，P<0.05），mRNA表达无变化。