靶向胰腺癌PANC-1细胞整合素连接激酶基因RNA干扰质粒的构建及鉴定

　　近日，中国医科大学附属第一院普通外科胰腺外科研究人员发表论文，旨在构建整合素连接激酶(integrin-linkedkinase，ILK)基因RNA干扰(RNA interference，RNAi)重组质粒并检测其对胰腺癌PANC-1细胞ILK基因表达的干扰效率，为进一步研究胰腺癌中ILK基因功能奠定实验基础和理论依据。研究指出，成功构建ILK基因RNA干扰重组质粒，重组质粒能有效抑制胰腺癌Panc-1细胞ILK基因表达。为进一步研究ILK在胰腺癌中的基因功能奠定基础。该文发表在2012年第05期《世界华人消化杂志》上。

　　设计并构建3条含有针对ILK基因的小干扰RNA(small interfering RNA，siRNA)序列的重组质粒并进行DNA测序。通过阳离子脂质体Lipofectamine 2000将重组质粒转入人胰腺癌细胞株Panc-1细胞中，G418压力筛选至得到稳定转染细胞克隆，利用Real-Time PCR和Western blot检测ILK基因的表达抑制情况。筛选出干扰效率最高的重组质粒。

　　经DNA测序证实胰腺癌PANC-1细胞ILK基因的R NA干扰重组质粒构建成功;重组质粒稳定转染Panc-1细胞后(各组转染效率均>90%)，各实验组ILK基因表达均被有效地抑制，其中重组质粒-2的干扰效率最高，其mRNA及ILK表达显著下调，其抑制率分别为93.01%和65.69%;ILK mRNA表达较阴性对照组、空质粒组表达量显著下降(0.090±0.009vs 1.147±0.110，1.005±0.121，P<0.01)。