体外诱导羊膜上皮细胞转分化为雌性生殖细胞的初步实验研究

　　近日，四川大学华西第二医院妇产科研究人员发表论文，旨在建立体外分离、培养人羊膜上皮细胞（hAECs）的方法，研究其向雌性生殖细胞转分化的潜能。研究指出，人卵泡液可在体外诱导hAECs向雌性生殖细胞方向转分化。该文发表在2013年第03期《四川大学学报(医学版)》杂志上。

　　体外分离、培养并鉴定hAECs后，采用添加5%人卵泡液的培养基作为诱导剂，倒置显微镜下观察细胞形态的改变，化学发光免疫技术检测培养基中雌二醇（E2）含量的变化，应用实时荧光定量PCR（RT-PCR）、Western blot等方法检测雌性生殖细胞相关基因及蛋白表达水平的变化。

　　体外培养hAECs呈多角形，具有上皮细胞特有的铺路石样外观，并表达其特异性细胞角蛋白19（CK19），同时能表达胚胎干细胞（ESC）特异的转录因子POU5f1转录因子4（Oct-4）。采用添加5%人卵泡液的培养基诱导14d后，对照组大部分细胞仍保持上皮细胞的多角形态，而诱导组细胞融合呈集落样生长。E2含量检测结果显示，对照组无E2生成，而诱导组E2水平从第8d开始增加，至第10d达到高峰，然后下降。RT-PCR、Western blot结果表明，诱导组生殖细胞特异性基因生长分化因子9（GDF9）、无精症缺失基因（DAZL）的mRNA表达水平明显升高（P<0.05），而联会复合体蛋白3（SCP3）的mRNA表达水平无明显升高（P>0.05），DAZL的蛋白表达水平亦明显增加（P<0.05）。