CD41-42突变型β地中海贫血重组载体pEGFP-C2-CD41-42的构建及其稳定转染HeLa细

　　近日，广西医科大学第一附属医院 广西地中海贫血防治重点实验室研究人员发表论文，旨在构建CD41-42突变型β地中海贫血重组载体pEGFP-C2-CD41-42和HeLaCD41-42细胞模型，为β地中海贫血CD41-42突变型细胞、小鼠模型建立及进一步基因治疗提供依据。研究指出，成功构建β地中海贫血pEGFP-C2-βCD41-42突变基因重组载体，并成功构建HeLaCD41-42细胞模型。该文发表在2014年第02期《吉林大学学报(医学版)》杂志上。

　　在β地中海贫血CD41-42突变的纯合子患者外周血中提取DNA，PCR法扩增含有βCD41-42的β-珠蛋白基因片段。将PCR产物βCD41-42珠蛋白基因克隆到pEGFP-C2载体中，用脂质体2000将pEGFP-C2-βCD41-42质粒转染HeLa细胞，观察转染后βCD41-42在HeLa细胞中荧光表达情况。RT-PCR法检测βCD41-42在HeLa细胞中的表达。

　　重组质粒pEGFP-C2-βCD41-42转染HeLa细胞24h后细胞发出绿色荧光，G418筛选后，有大量荧光表达。RT-PCR扩增得到227bp的特异性条带，而稳定转染pEGFP-C2空质粒的HeLa细胞中不表达特异性条带。