人pcDNA3.1（+）-Cav-1真核表达载体的构建及鉴定

　　近日，湖南省脑科医院病理科研究人员发表论文，旨在构建pcDNA3.1（+）-Cav-1真核表达载体，建立稳定转染pcCav-1的6-10B细胞系（6-10B-Cav-1）。研究指出，人Cav-1重组真核表达载体pcDNA3.1（+）-Cav-1构建成功并获得稳定表达Cav-1的6-10B细胞，为进一步检测Cav-1在鼻咽癌转移过程的作用奠定基础。该文发表在2012年第06期《中国现代医学杂志》上。

　　提取5-8F细胞总RNA，利用RT-PCR获取caveolin-1（Cav-1）开放读码框（Openreading frame，ORF）序列构建Cav-1/TA亚克隆载体，再将双酶切后的目的片段连入pcDNA3.1（+）真核表达载体并转染6-10B细胞。

　　RT-PCR扩增Cav-1基因ORF序列在783 bp附近见目的条带；质粒酶切鉴定及菌落PCR鉴定分别在783 bp及346 bp附近见目的条带；转染6-10B细胞后，转染组与对照组相比，Cav-1在mRNA水平表达差异具有统计学意义（P=0.027），在蛋白质水平前者比后者高出2倍以上。