酸性神经酰胺酶shRNA表达载体的构建及鉴定

　　近日，北京大学第一医院耳鼻咽喉头颈外科研究人员发表论文，旨在构建特异性抑制人酸性神经酰胺酶（acid ceramidase，AC）基因表达的短发夹RNA（short hairpin RNA，shRNA）载体，筛选出基因沉默效果最明显的shRNA，以明了shRNA对头颈肿瘤细胞AC表达的影响。研究指出，成功构建特异性抑制AC表达的shRNA表达载体，为进一步研究AC的功能及头颈肿瘤的基因治疗奠定基础。该文发表在2013年第05期《中国耳鼻咽喉头颈外科》杂志上。

　　针对人AC基因设计并构建4个shRNA质粒，转染人肾上皮细胞系293T细胞，通过实时定量PCR及Western blot的方法筛选出沉默效果最明显的shRNA序列，以该序列构建慢病毒载体感染人鼻咽癌CNE-2Z细胞及人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞，验证其对这些细胞的基因沉默效果。

　　4个shRNA质粒转染293T细胞后AC mRNA及蛋白表达均降低，其中sh1340的抑制效果最明显。sh1340慢病毒感染肿瘤细胞后AC基因沉默的效果分别为CNE-2Z（79.3±0.5）%和Hep-2（80.7±5.1）%。