携人PTHLH基因慢病毒表达载体的构建

　　近日，韶关学院医学院研究人员发表论文，旨在构建携带人甲状旁腺相关激素（PTHLH）基因的慢病毒表达载体pGC-FU/PTHLH。研究指出，成功构建携人PTHLH基因慢病毒表达载体，为进一步研究PTHLH基因在鼻咽癌转移中的作用及鼻咽癌发病分子机制奠定了基础。该文发表在2012年第03期《热带医学杂志》杂志上。

　　酶切载体pGC-FU，根据人PTHLH基因合成特定引物，扩增目的基因片段，将其克隆到pGC-FU质粒（含EGFP基因）上，菌落PCR鉴定及测序分析重组载体，使用Lipofectamine 2000诱导转染pGC-FU、pHelper1.0和pHelper2.0载体三质粒进入293T细胞包装慢病毒，并用带PTHLH的慢病毒感染293T细胞和鼻咽癌CEN1细胞确认慢病毒包装是否成功。

　　菌液PCR产物琼脂糖凝胶电泳鉴定显示，与理论预计值阳性转化子735bp，阴性转化子198bp基本相吻合；PCR鉴定阳性的克隆进行测序和比对分析，结果完全匹配，进一步鉴定载体构建成功。分别将质粒包装系统共转染293T细胞，包装产生空白对照慢病毒（pGC-FU）和过表达PTHLH的慢病毒（pGC-FU/PTHLH）；或用携带PTHLH和EGFP基因的病毒上清感染CNE1细胞，48h后，倒置荧光显微镜下观察293T和CNE1细胞，均可见绿色荧光，转染成功。