不同剂量柚皮素介导的促氧化作用及其对CNE2细胞生长的调控

　　近期，桂林医学院生物技术学院研究人员发表论文，旨在柚皮素重要的生理活性使其具有广泛的开发应用前景。文中探讨不同剂量柚皮素对人鼻咽癌CNE2细胞生长的影响及其相关作用机制。研究指出，在0.005～0.8 mg/mL剂量范围，柚皮素对CNE2细胞生长具有双向调节作用，相对较低剂量体现为一定的促癌活性，相对较高剂量则体现为强烈的抑癌活性。该文发表在2014年第04期《医学研究生学报》杂志上。

　　MTT法检测不同剂量柚皮素（0、0.005、0.01、0.02、0.04、0.06、0.08、0.1、0.2、0.4、0.8 mg/mL）作用CNE2细胞不同时间（24、48、72 h）对其细胞生长率的影响；流式细胞仪检测不同剂量柚皮素（0、0.02、0.04 mg/mL）作用CNE2细胞48 h对其细胞周期的影响；采用Hochest 33258荧光染色观察不同剂量柚皮素（0、0.2、0.4 mg/mL）作用CNE2细胞48 h对其细胞凋亡形态的变化；采用Annexin V-FITC流式细胞术检测不同剂量柚皮素（0、0.2、0.4 mg/mL）作用CNE2细胞48 h对其细胞凋亡率的影响；采用2，7-二氯乙酰乙酸（2，7-dichloro fluorescein diacetate，DCFH-DA）荧光探针检测不同剂量柚皮素（0、0.02、0.04、0.2、0.4 mg/mL）作用CNE2细胞48h对其细胞内活性氧簇（reactive oxygen species，ROS）的变化；采用实时荧光定量PCR法（real-tmie fluorescence quantitative PCR，qPCR）检测不同剂量柚皮素（0、0.02、0.04、0.2、0.4 mg/mL）作用CNE2细胞48 h对C-fos、Bax及Bcl-2基因mRNA表达水平的变化。

　　与对照组相比，0.02、0.04 mg/mL柚皮素能引发CNE2细胞内ROS含量低水平升高，ROS的MFI分别为5186±183.50、5508±155.37，差异有统计学意义（P<0.05），由此诱导细胞增殖调控基因C-fos表达，差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01），加速细胞周期运转，促进CNE2细胞分裂增殖；而0.2、0.4 mg/mL柚皮素则能引发ROS大量产生，ROS的MFI分别为10 758±179.82、11 241±114.45，差异有统计学意义（P<0.01），由此诱导促凋亡基因Bax及抑制抗凋亡基因Bcl-2表达，促进CNE2细胞凋亡，差异有统计学意义（P<0.01），有效抑制CNE2细胞增殖。