shRNA-hIAP2增强CNE-1鼻咽癌细胞对放射敏感性的实验研究

　　近日，中南大学湘雅医院肿瘤科研究人员发表论文，旨在构建人凋亡抑制蛋白（human inhibitor of apoptosis protein2，hIAP-2）的shRNA，靶向抑制hIAP-2基因联合放疗，探讨其对CNE1鼻咽癌细胞株放射敏感性的影响。研究指出，转染hIAP-2基因沉默后放射可增加鼻咽癌细胞凋亡率，降低其侵袭能力，能够起到放疗增敏作用。该文发表在2013年第05期《中国耳鼻咽喉颅底外科杂志》上。

　　首先采用MTT法确定最佳放射剂量；再构建4条hIAP-2-shRNA沉默片段并用脂质体法转染CNE1细胞，最后采用实时荧光定量PCR（Q-PCR）和免疫印迹法（Western blot，WB）筛选出最佳沉默shRNA序列；用最佳沉默shRNA序列转染CNE1细胞，分别设置转染放射线照射组与未转染放射线照射组，采用实时定量PCR和WB检测hIAP-2的基因及其蛋白表达；流式细胞术测细胞凋亡，transwell测细胞侵袭能力。

　　MTT法明确4 Gy为最佳放射剂量；Q-PCR和WB检测结果显示4条hIAP-2-shRNA均能有效抑制hIAP-2 mRNA及蛋白表达（P<0.05），以hIAP-2-shRNA2沉默效果最显著（P<0.05）；Q-PCR和WB检测结果显示转染hIAP-2-shRNA2后照射组与未转染hIAP-2-shRNA2照射组的CNE1细胞中hIAP-2基因与蛋白表达比较，差异具有统计学意义（P<0.05）；流式细胞术检测结果显示转染hIAP-2-shRNA2后照射组比未转染hIAP-2-shRNA2照射组凋亡率差异具有统计学意义（P<0.05）；transwell检测结果显示转染hIAP-2-shRNA2后照射组与未转染hIAP-2-shRNA2照射组侵袭能力差异具有统计学意义（P<0.05）。