Hath1基因真核表达载体的构建及其在SH-SY5Y细胞中的表达

　　近日，内蒙古民族大学附属医院耳鼻喉科研究人员发表论文，旨在构建携带Hath1基因的真核表达载体并转染神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y），观察其在SH-SY5Y细胞中的表达。研究指出，本研究成功地使Hath1基因在SH-SY5Y细胞中得到表达，为转染耳蜗组织的实验及探索治疗耳聋新方法奠定基础。该文发表在2013年第04期《吉林大学学报(医学版)》杂志上。

　　从人全血中提取DNA，克隆Hath1基因，同时扩增绿色荧光蛋白（GFP）gfp基因；利用引物GFP-R和Hath1-F扩增融合基因gfp-Hath1，克隆至pMD18-T中；经XhoⅠ和EcoRⅠ限制性内切酶酶切，构建重组表达质粒pCDNA3.1（+）：：gfp-Hath1；转染SH-SY5Y细胞。

　　PCR扩增，融合基因gfp-Hath1扩增条带大小为2 023bp，表明成功扩增gfp-Hath1融合基因。经双酶切鉴定，成功构建真核表达质粒pCDNA3.1（+）：：gfp-Hath1。采用间接免疫荧光技术在荧光显微镜下观察到5H-SY5Y细胞中有GFP表达。